導讀:
熒光抗體標記技術是將熒光標記物以化學方法與特異性抗體共價結合，在抗體-熒光結合物與對應的抗原特異結合后，通過熒光顯微鏡等儀器設備觀察熒光標記物的信號情況，從而實現(xiàn)對待檢物的定位、定性或定量檢測。在實驗過程中，我們經(jīng)常會遇到如何選擇熒光標記物、多重熒光檢測時如何進行熒光標記物的搭配等問題。為此，小編特意采訪了Bioss抗體標記專家，讓我們一起聽聽專家的分享吧~
Q1:市面上的熒光標記物很多，如何判斷一個熒光標記物是否適合標記抗體呢？
作為標記的熒光標記物應符合以下要求：
● 具有能與抗體形成共價鍵的化學基團，且與抗體結合后不易解離，同時未結合的熒光標記物及其降解產(chǎn)物易于清除；
● 熒光效率高，在與抗體結合后仍能保持較高的熒光效率；
● 與抗體結合后不影響抗體原有的生化與免疫性質(zhì)；
● 標記方法簡單，安全無毒；
● 與抗體結合穩(wěn)定，終產(chǎn)物易于保存。
Q2:在Bioss實驗室，經(jīng)常用到哪些熒光標記物，可以推薦一些嗎？
Bioss實驗室可以提供基于29種標記方式的標記抗體產(chǎn)品及標記服務，比較常用的有：
● 小分子熒光素：FITC, Rhodamin● Cy系列：Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7
● Alexa Fluor系列：AF350, AF488, AF555, AF594, AF647, AF680, AF750
● 熒光蛋白：PE, APC, PerCP
● 熒光串聯(lián)標記：PE-Cy, PerCP-Cy等
Q3:以上提到的熒光標記物，經(jīng)常會用于哪些實驗呢？
下表匯總了不同種類熒光標記物的適用實驗類型，供大家參考
Q4:對于有多重熒光檢測需求的實驗應用，比如多重免疫熒光檢測和流式細胞術等，在做多重熒光染色方案設計時，需要遵循哪些原則？
在Bioss實驗室，我們做多重熒光檢測設計實驗時，一般會遵循以下原則：
● 確認檢測設備的參數(shù)：熒光顯微鏡通常是一個鹵素光源配若干個濾光片，流式細胞儀通常是2-3個激光管配若干個檢測通道；
● 在可選范圍內(nèi)選擇更強的熒光，常用熒光及其強弱程度排序: PE>APC>PE-Cy5>PE-Cy5.5/PerCP-Cy5.5>FITC；
● 細胞表面蛋白可以選擇PE等熒光蛋白，需要進入到細胞內(nèi)的檢測，盡量選擇小分子熒光素；
● 對熒光多重染色，熒光素與抗體組合需要考慮目的抗原的含量，樣本中含量低的指標優(yōu)先選擇熒光較強的熒光素。如果是分步加入熒光抗體，考慮到熒光的衰減，按照熒光素的強弱排序依次加入。
